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·生物·参考答案及解析用限制酶和DNA连接酶，DNA连接酶中的T4DNA【解析】(1)凝血IX因子基因是真核生物体内的基连接酶既可以连接黏性末端，又可以连接平末端。因，烟草细胞是真核细胞，能够合成hFIX并对其进(2)利用PCR技术可以在短时间内获得大量的目的行加工和修饰，而大肠杆菌是原核细胞，无法对产生基因，需要热稳定DNA聚合酶(Taq酶)的催化；基的hFIX进行加工，因此科研人员选择烟草细胞作为因工程的核心步骤是构建基因表达载体；根据题意受体细胞，而未选择大肠杆菌。分析，质粒运载体用EcoR I切割，而另二种酶也可(2)由已知的hFX氨基酸序列，可以推测出相应的以，则该酶与EcoR I切割产生的DNA片段末端信使RNA序列，然后按照碱基互补配对的原则，推相同。测出它的基因的核苷酸序列，再通过化学方法或人(3)利用农杆菌转化法将目的基因导入植物细胞，由工合成得到hFIX基因。由于有的氨基酸有多种密于农杆菌的Ti质粒上只有T-DNA片段能够整合到码子与之相对应，因此由同一氨基酸序列可以得到受体细胞的染色体上，所以构建重组质粒时，应该将多种RNA碱基排列顺序，进而可推测出多种基因碱目的基因和标记基因都插入质粒的T-DNA片段内；基序列，因此用该方法得到的hFIX基因碱基排列检测目的基因表达产生的mRNA应该用分子杂交顺序可以有多种。技术。(3)基因表达载体的组成：目的基因十启动子+终止3.(15分，除标注外，每空2分)子+标记基因，转化烟草的基因表达载体的组成除(1)基因表达载体的构建复制原点(1分)》了启动子、hFIX基因和终止子之外，还需具有的结(2)PCR限制酶Ⅱ基因I构是标记基因。其中启动子在基因的首段，它是(3)农杆菌转化营养激素RNA聚合酶的结合位点，能控制着转录的开始；终【解析】(1)培育“金色大米”的基因工程操作四步曲止子在基因的尾端，它控制着转录的结束；标记基因中，其核心是基因表达载体的构建。通过该操作形便于目的基因的鉴定和筛选，鉴别受体细胞中是否成了图中的c重组质粒，它的构成至少包括目的基含有hFIX基因，从而将含有hFIX基因的细胞筛因、标记基因、复制原点、启动子和终止子等。选出来（或重组DNA的筛选与鉴定）。(2)在研究过程中，获取了目的基因后采用PCR技(4)目的基因导人植物细胞常用的方法是农杆菌转术进行扩增。据图分析，目的基因的两侧有化法，目的基因导入受体细胞后，经植物组织培养过GGATCC一、一GATC一两种序列，由于酶I的程最终获得四株转hFIX基因的烟草。识别序列和切点是一GGATCC一，酶Ⅱ的识别序(5)检测hFIX基因是否翻译成hFIX的方法是抗列和切点是一↓GATC一，因此只能选择限制酶Ⅱ原一抗体杂交法，主要步骤是将转基因烟草制成匀获取目的基因。图中可以看出目的基因插入到基因浆后提取蛋白质，用抗hFIX的抗体进行抗原一抗体Ⅱ中，因此检验重组载体导入能否成功，需要利用基杂交，观察是否出现杂交带。hFIX基因在转基因烟因工作为标记基因。草基因组中的拷贝数不同；hFIX基因在转基因烟草(3)过程d通常采用农杆菌转化法，过程e将水稻细基因组中的整合位置不同，因此hFIX基因在不同胞培养成完整植株运用了细胞工程中的植物组织培转基因烟草中的表达存在较大的差异。养技术，在该技术应用的过程中，关键步骤是利用含5.(15分，除标注外，每空2分)有一定营养和激素的培养基诱导植物细胞进行脱分(1)Ca+(CaCl2)不能不论农杆菌中是否导入基化形成愈伤组织，然后再分化形成植株因D,农杆菌都能在含有该抗生素的培养基上生长4.(15分，除标注外，每空2分)(4分)(1)烟草细胞是真核细胞，能够合成hFIX并对其进(2)2、31、2行加工和修饰，而大肠杆菌是原核细胞，无法对产生(3)等渗(3分)的hFIX进行加工【解析】(1)将目的基因转入农杆菌之前，常用Ca2+(2)化学方法或人工合成有的氨基酸有多种密码处理农杆菌使其成为感受态细胞。根据目的基因的子与之相对应，因此由同一氨基酸序列可以得到多酶切位点可知，将目的基因导入农杆菌不会破坏农种RNA碱基排列顺序，进而可推测出多种基因碱基杆菌T质粒中的抗生素抗性基因，因此无论农杆菌序列中是否导入基因D,农杆菌都能在含有该抗生素的(3)标记基因(1分)鉴别受体细胞中是否含有培养基上生长，即不能用T1质粒中的抗生素抗性基hFIX基因，从而将含有hFIX基因的细胞筛选出来因来筛选鉴定已经成功导人基因D的农杆菌。(或重组DNA的筛选与鉴定)(2)由图可知，基因D含有三个酶切位点，若要保留(4)植物组织培养tms、tmr,则使用酶2和酶3切割Ti质粒和目的基(5)将转基因烟草制成匀浆后提取蛋白质，用抗因，若要剔除tms、tmr,则使用酶1和酶2切割Ti质hFIX的抗体进行抗原一抗体杂交，观察是否出现杂粒和目的基因。交带hFIX基因在转基因烟草基因组中的拷贝数不(3)用纤维素酶和果胶酶处理两种细胞获得的原生同；hFIX基因在转基因烟草基因组中的整合位置不同质体没有细胞壁，为了防止吸水涨破，应将开白花植69